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Dosage des Antiépileptiques par HPLC

Les médicaments antiépileptiques, anticonvulsifs, anticonvulsivants ou anticomitiaux, appartiennent à un groupe varié de médicaments utilisés pour atténuer voire à supprimer la fréquence ou la sévérité des crises d’épilepsie. Leur action est symptomatique et non pas curative. [1]Article : Antiépileptique – Wikipédia

Dosage

Cette technique décrit le dosage des antiépileptiques par HPLC-UV.

LE SYSTEME HPLC

Colonne : thermo C18 ; 250mm.

Detecteur : Finnigan Spectra System UV6000LP.

Pompe : Spectra system 1000XR.

Degazeur : Spectra System SCM1000.

Interface : Spectra System SN4000.

Four à colonne : eppendorf CH-500.

Réactifs

Phase mobile :

Méthanol-ACN-Tpn (22-18-60%)

Solution tampon à 15 mM :

Dipotassium hydrogenophosphate (K2HPO4) ……………………………………..1,3g.

Triéthylamine ………………………………………………………………………………..3,1 ml

Eau distillée……………………………………………………………………………….qsp 500 ml

Ajuster la solution tampon à pH=3 avec l’acide orthophosphorique.

CONDITIONS CHROMATOGRAPHIQUES

Pression : 240 bars.

Debit : 1,2ml/min

Longueur d’onde : 210 nm.

Température : 25°.

COURBE D’ÉTALONNAGE ET TRAITEMENT D’ÉCHANTILLON

Réactifs Standard Contrôle I ContrôleII Contrôle III Echantillon
  100µl 100µl 100µl 100µl 100µl
Etalon Interne 150µl 150µl 150µl 150µl 150µl
Passer au vortex pendant 2 sec
Réac. de précipitation 50µl 50µl 50µl 50µl 50µl
Passer au vortex pendant 60 sec puis centrifuger pd 10 à 15 mn à 13000 tr/mn
  • Prélever 100µl de surnageant.
Tampon de stabilisation 100µl 100µl 100µl 100µl 100µl

Agiter et injecter 20µl dans le système HPLC.

 

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Références   [ + ]

1. Article : Antiépileptique – Wikipédia

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