Liste des tests colorimétriques

Dans cet article vous trouverez une liste non-exhaustive des réactifs colorimétriques (composition, indication) utilisés dans le domaine de la Toxicologie Analytique.

Sommaire

Hydroxyde d’ammonium

méthode

Ajouter à l’échantillon quelques gouttes d’acide chlorhydrique 10 M suivi de quelques cristaux de chlorate de potassium et évaporer le mélange à sec. Observez la couleur du résidu puis ajoutez deux ou trois gouttes d’hydroxyde d’ammonium 2 M et observez de nouveau la couleur.

Les indications

Un résidu rouge, rose, orange ou jaune, qui change de rose, rouge ou violet après l’addition d’hydroxyde d’ammonium indique la présence d’une xanthine.

Nitrate d’argent ammoniacal

Réactif

À 20 ml de nitrate d’argent 0,1 M, ajouter une solution suffisante d’ammoniaque pour dissoudre le précipité initial.

méthode

Dissoudre l’échantillon dans une quantité minimale d’eau, en ajoutant de l’éthanol si nécessaire, ajouter un volume égal du réactif et noter toute couleur qui se développe. Chauffer le mélange dans un bain-marie à 100 ° pendant 30 s.

Les indications

Les couleurs rouge, jaune, marron ou noir (surtout à température ambiante) indiquent une force réductrice puissante, qui se produit lorsque les atomes de carbone adjacents dans un anneau portent chacun un groupe hydroxyle. Il n’y a pas de réponse lorsque les groupes hydroxyle sont méta les uns avec les autres, mais il existe une certaine restauration de la puissance réductrice lorsqu’ils sont un para l’autre. Une certaine production de couleur est également obtenue avec des liaisons éthynyliques, mais pas avec des liaisons éthyléniques. L’éthchlorvynol et l’éthinylestradiol donnent tous deux un précipité blanc qui devient jaune lors du chauffage. Le Carbidopa donne un miroir argenté au chauffage.

Pentaclorure d’antimoine

Réactif

Sécher du trichlorure d’antimoine sur du pentoxyde de phosphore, faire fondre le matériau séché (P.F. 73 °) et passer du chlore sec dans la masse fondue jusqu’à obtention d’un liquide fumant jaune. Ajouter ce liquide à environ dix fois son volume de chloroforme, filtrer la solution dans une bouteille bouchée de verre sombre et la conserver dans un déshydrateur.

méthode

Placez une goutte d’une solution éthanolique de l’échantillon sur un papier filtre, ajoutez une goutte du réactif et séchez dans un courant d’air chaud. Alternativement, le test peut être effectué en ajoutant une goutte du réactif à l’échantillon sur un carreau blanc.

Les indications

Diverses couleurs sont obtenues avec les glycosides cardiaques, leurs aglycones et certains œstrogènes et corticostéroïdes. Aucune couleur n’est obtenue avec la beclometasone, la cortisone, la fluocinolone, le fludroxycortide, la prednisolone, la prednisone, la progestérone, la testostérone ou la triamcinolone.

Composés aromatiques

Méthode 1

Placez une partie de l’échantillon dans chacun des deux tubes à essai et, dans un tube, ajoutez de l’hydroxyde de sodium solide. Chauffer soigneusement les deux tubes, laisser évacuer la vapeur d’eau, insérer dans les vapeurs dans chaque tube un tube capillaire ouvert contenant du réactif Marquis et observer la couleur du réactif.

Les indications

Les couleurs rouges ou orange indiquent que l’échantillon est de nature aromatique. Les couleurs résultent probablement de la libération de traces d’hydrocarbures aromatiques, de phénols, etc. Les couleurs obtenues après chauffage avec de l’hydroxyde de sodium indiquent généralement la présence d’acides aromatiques. Les couleurs obtenues après chauffage sans hydroxyde de sodium indiquent généralement la présence de phénols, d’acides phénoliques et d’aldéhydes qui contiennent plus d’un groupe hydroxyle.

Un résultat négatif n’implique pas nécessairement que la substance n’est pas aromatique.

Méthode 2

Ajouter deux ou trois gouttes d’acide nitrique à l’échantillon, chauffer dans un bain-marie à 100 ° pendant 1 min, refroidir le mélange, diluer trois à quatre fois avec de l’eau et rendre la solution alcaline en ajoutant 40% (w / v) solution d’hydroxyde de sodium.

Les indications

Un changement de couleur incolore ou jaune en solution acide à des couleurs plus foncées (p. Ex. Orange ou rouge-orange) après l’addition d’hydroxyde de sodium indique la présence d’un cycle benzénique dans la molécule, probablement grâce à la production d’un nitrophénol ou d’un autre composé nitro.

Certains composés (par exemple, le diazépam, la méthaqualone) donnent un résultat négatif. Les couleurs d’orange sont données par certains corticostéroïdes non aromatiques (p. Ex. Cortisone), par des substances contenant du soufre et par des composés qui contiennent déjà un groupe nitro aromatique (p. Ex. Le nifursol).

Certaines substances donnent des couleurs distinctes avec de l’acide nitrique froid, mais les couleurs disparaissent lors du chauffage.

Le réactif de Benedict

Réactif

Dissoudre 1,73 g de sulfate de cuivre dans 10 ml d’eau. Dissoudre 17,3 g de citrate trisodique et 10 g de carbonate de sodium anhydre dans 80 ml d’eau à l’aide de chaleur; verser cette solution dans la solution de sulfate de cuivre et diluer le mélange à 100 ml.

méthode

Ajouter 0,5 ml du réactif à l’échantillon et chauffer dans un bain-marie à 100 ° pendant 3 min.

Les indications

La formation de l’oxyde cuivreux rouge se produit avec des agents réducteurs forts tels que l’acide ascorbique, les dithionites, certains composés phénoliques qui contiennent deux groupes hydroxyles l’un par rapport à l’autre et des composés qui contiennent au moins quatre groupes hydroxyle sur un cycle non aromatique (p. Ex. Glucose, tétracyclines ).

Une réponse faible (couleurs orange-brun ou marron) est donnée par la streptomycine, l’hydroxylamine et les hydrazines substituées (par exemple la phénelzine). Aucune couleur n’est obtenue avec la beclométasone, les glycosides cardiaques et l’estriol (deux groupes hydroxyle) ou la clindamycine (trois groupes hydroxyle).

Le disulfure de carbone

méthode

Mélanger l’échantillon avec 1 ml d’eau et 0,1 ml d’une solution à 1% (p / v) de tétraborate de sodium, ajouter 0,2 ml d’une solution à 10% v / v de disulfure de carbone dans de l’éthanol et chauffer dans un bain-marie à 100 ° pendant 3 min; refroidir la solution et ajouter trois gouttes de 0,1 M de nitrate d’argent.

Les indications

Une couleur brune indique la présence d’un dithiocarbamate, ce qui suggère que la substance originale était une amine primaire ou secondaire aliphatique ou hétérocyclique. L’échantillon original doit être testé pour s’assurer qu’il ne donne pas de couleur marron au nitrate d’argent seul.

Acide Chromotropique

Réactif

Dissoudre 20 mg d’acide chromotropique dans 10 ml d’acide sulfurique.

méthode

Ajouter une petite quantité d’échantillon, solide ou en solution, à 1 mL du réactif. Notez toute couleur qui peut être produite, puis ajoutez la solution goutte à goutte à 0,5 ml d’eau, avec refroidissement. Les substances qui donnent une couleur avec de l’acide sulfurique froid doivent être exclues.

Le thiocyanate de cobalt (voir le test de Scott)

Réactif

Une solution à 2% (p / v) de thiocyanate de cobalt dans l’eau
Acide phosphorique
1 g de H2PtCl6,6H20 dans 20 ml de H3PO4

Mélanger neuf parties de la solution 1 et trois parties de la solution 2, ajouter une partie de la solution 3 et bien mélanger. Ajouter neuf parties d’eau distillée et mélanger. Lorsque la solution devient rose, elle est prête à l’emploi.

méthode

Ajoutez quelques gouttes du réactif à l’échantillon à tester.

Limite de détection ( LOD ): cocaïne HCl 60 μg, méthadone HCl 15 μg.

Alcool coniférique (amines aromatiques primaires)

Réactif

Chauffer 0,1 g d’alcool de coniféryle jusqu’à ce qu’il fond (pf 74 °), se dissoudre dans 3 ml d’éthanol et diluer à 10 ml avec de l’éthanol.

méthode

Placez une goutte d’une solution de l’échantillon sur un papier filtre, ajoutez une goutte du réactif et exposez le papier à des vapeurs d’acide chlorhydrique.

Les indications

Une couleur orange indique la présence d’une amine primaire aromatique dans laquelle le groupe amino est attaché directement à un cycle benzénique.

Une réaction anormale est obtenue avec la diphénylamine (orange vif).

Sulfate de cuivre

Méthode 1

Dissoudre l’échantillon dans un volume minimum d’hydroxyde de sodium 0,1 M et ajouter une solution à 1% (p / v) de sulfate de cuivre, goutte à goutte, jusqu’à ce que le changement de couleur soit terminé.

Les indications

Les couleurs vertes, bleues ou marron indiquent la présence d’un sulfonamide.

Méthode 2

Ajouter une ou deux gouttes d’une solution à 1% (p / v) de sulfate de cuivre à l’échantillon sur une tuile blanche.

Les indications

Une couleur bleue indique la présence d’un sel alcalin d’un acide gras, tel que du cromoglicate de sodium (1-2 min) ou du valproate. Les couleurs ne sont pas produites par un changement de pH (certains des sels alcalins vont changer le pH), car des résultats négatifs sont obtenus avec du bicarbonate de sodium.

Le bromure de cyanogène

Réactif

Décolorer la solution de brome en ajoutant du cyanure de potassium solide, puis ajouter plus de solution de brome jusqu’à ce que la solution soit jaune pâle.
Préparez une solution saturée d’aniline dans l’eau.

Les solutions 1 et 2 sont stables pendant 1 semaine. Mélanger les volumes égaux des deux solutions immédiatement avant le test.

méthode

Ajoutez une goutte du réactif mélangé à l’échantillon sur un carreau blanc.

Les indications

Les couleurs rouge, orange ou jaune indiquent la présence d’un cycle de pyridine mono-substitué. La longueur de chaîne croissante du groupe de substituants affaiblit la réponse; une réponse retardée est obtenue lorsque le cycle pyridine est substitué par de l’azote adjacent à l’azote du cycle; une faible réponse est obtenue là où il y a un substituant C = O adjacent à l’azote du cycle. Il n’y a pas de réponse au test si l’anneau de pyridine est lié à un autre anneau, s’il est substitué à plus d’une position, ou si l’azote dans le cycle est substitué. Des résultats anormaux sont obtenus avec de l’azatadine (rose), du bisacodyle (sans réponse) et du tropicamide (violet-rose).

Diazocopulation

méthode

Dissoudre l’échantillon dans de l’acide chlorhydrique 2 M, et une goutte sur une tuile blanche ajouter une goutte d’une solution à 1% de nitrite de sodium et une goutte d’une solution à 4% de naphto-2-ol dans de l’hydroxyde de sodium 2 M.

Les indications

Une couleur rouge vif ou orange-rouge indique la présence d’une amine aromatique primaire. La diphénylamine ne donne pas de réaction; L’aminonitrothiazole (solide) donne une couleur violette.

Réactif de Dille-Koppanyi modifié (un test général pour les composés de type barbiturique)

Réactif

Dissoudre 0,1 g d’acétate de di-hydrate de cobalt (II) dans 100 ml de methanol. Ajouter 0,2 ml d’acide acétique glacial et mélanger.
Ajouter 5 ml d’isopropylamine à 95 ml de methanol.

méthode

Ajouter deux gouttes de solution 1 au médicament, puis une goutte de solution 2.

Les indications

Une couleur violette clair (bleu-violet) indique la présence d’un barbiturique. D’autres composés réactifs sont les hydantaines, les sulfonamides, la pyrimadine, la pipéridine, le méthylprylone. Le LOD est de 25 μg ou moins.

p-Diméthylaminobenzaldéhyde (réactif Wasicky ou réactif Van-Urk, test général pour les alcaloïdes de l’ergot)

Réactif

Dissoudre 2,0 g de p-diméthylaminobenzaldéhyde ( p-DMAB ) à 50 ml d’éthanol à 95% et 50 ml d’acide chlorhydrique concentré. Le réactif doit être fraîchement préparé.

méthode

Ajouter le réactif à l’échantillon dans un tube à essai, réchauffement si nécessaire. Observez toute couleur produite, puis diluez soigneusement avec de l’eau ou époussez des taches séchées sur du papier filtre et de la chaleur.

Les indications

Les couleurs sont fournies par un certain nombre de substances, y compris les alcaloïdes de l’ergot, la diméthyltryptamine, la psilocine, la psilocybine (donne une couleur violette), les cannabinols et certains indoles dans lesquels le cycle indole n’est pas lié à un autre cycle conjugué (changement de rouge à violet lors de la dilution) , et certains phénols et amines phénoliques (rouge ou orange, généralement changé en violet lors de la dilution). D’autres types de composés répondent également.

Le LOD pour lysergide ( LSD ) est de 6 μg.

Test de diphénylamine

Réactif

Mélanger 0,5 g de diphénylamine dans 20 ml d’eau et diluer à 100 ml avec de l’acide sulfurique concentré.

méthode

Appliquer le réactif sur l’échantillon sur une tuile blanche ou dans un tube à essai.

Les indications

Une couleur bleue indique la présence d’un agent oxydant tel que bromate, chlorate, chromate, dichromate, iodate, plomb (IV), manganèse (III, IV, VII), nitrate, nitrite, permanganate ou vanadate.

Ce test a été modifié pour être utilisé sur des échantillons de sang pour détecter l’éthchlorvynol (Caughlin 1991). Le sang (0,5 ml) est mélangé avec 1,0 ml d’acétone et le vortex est mélangé. L’échantillon est centrifugé et 50 μL du surnageant sont ajoutés à 50 μL de réactif à la diphénylamine et à 25 μL de chloroforme. Le mélange est mixé par vortex et laissé au repos. Une couleur rose qui se développe dans la couche de chloroforme indique l’éthchlorvynol.

Réactif Dragendorff (un réactif général pour les bases azotées)

Réactif

Dissoudre 1 g de sous-nitrate de bismuth dans 3 ml d’acide chlorhydrique 10 M à l’aide de chaleur. Diluer à 20 ml avec de l’eau et dissoudre 1 g d’iodure de potassium dans le mélange. Si le triiodure de bismuth noir se sépare, ajouter de l’acide chlorhydrique 2 M et plus d’iodure de potassium pour le dissoudre.

méthode

Dissoudre l’échantillon dans trois gouttes d’acide chlorhydrique 2 M, ajouter 2 à 3 ml du réactif et diluer à 10 ml avec de l’eau.

Les indications

Un précipité orange, rouge-orange ou orange-brun suggère la présence d’une base alcaloïdale (précipitée comme iodure de bismuth alcalinoïdal). Les amines primaires, secondaires, tertiaires et quaternaires donnent des résultats positifs. Ce réactif est couramment utilisé comme agent de pulvérisation ou de localisation pour détecter les alcaloïdes sur des plaques chromatographiques en couche mince.

Duquenois réactif, modifié

Réactif

Ajouter 2,5 ml d’acétaldéhyde et 2,0 g de vanilline à 100 ml d’éthanol à 95%.
Acide chlorhydrique concentré.
Chloroforme.

méthode

Placez l’échantillon solide ou un extrait d’éther de pétrole évaporé (ou autre solvant organique) de l’échantillon, dans un tube à essai et ajoutez trois gouttes de solution 1. Agitez pendant 1 min et ajoutez trois gouttes de solution 2. Agitez doucement et observez la couleur produite. Ajouter neuf gouttes de solution 3, mélanger vortex doucement et noter si la couleur est extraite du mélange.

Les indications

Un changement de couleur du gris au vert au bleu et au bleu violet suggère la présence de cannabis , mais la différenciation du café rôti et de l’huile de patchouli est requise. Le changement de couleur est mieux vu avec du nouveau médicament. La couleur violette n’est extraite dans la couche de chloroforme que lorsque le cannabis est présent. Le LOD est de 350 μg de tétrahydrocannabinol ( THC ). Aucune couleur n’est obtenue avec d’autres produits naturels, comme le basilic, la feuille de laurier, l’huile d’eucalyptus, le maïs, la marjolaine, le romarin, la sauge, le thym ou le tabac.

Le chlorure ferrique (réactif général pour les phénols, par exemple les salicylates)

Réactif

Dissoudre 5 g de chlorure ferrique anhydre, ou 8,25 g de chlorure ferrique hexahydraté, dans 100 ml d’eau distillée

méthode

Ajouter la solution de chlorure ferrique à l’échantillon ou une solution éthanolique de l’échantillon.

Les indications

Les couleurs rouge, orange, vert, bleu, violet ou marron indiquent la présence d’un composé phénolique, d’un acide gras ou d’une phénylpyrazoline. Des quantités élevées de phénothiazines peuvent également rendre ce test positif. Les salicylates donnent une couleur violette. Beaucoup de phénols ne donnent aucune couleur avec du chlorure ferrique lorsque l’eau est utilisée comme solvant, mais procurent des tests positifs lorsque des solvants anhydres tels que le chloroforme sont utilisés. L’aspirine (acide acétylsalicylique) ne donne pas de résultat positif à moins d’hydrolyser d’abord avec de l’hydroxyde de sodium concentré pour donner du salicylate.

Sulfate A ferreux (test pour nitrates et nitrites)

Réactif

À un volume d’une solution à 10% (p / v) de sulfate ferreux (FeSO4,7H2O), ajouter cinq volumes d’acide sulfurique avec refroidissement.

méthode

Ajouter l’échantillon à 0,5 ml du réactif.

Les indications

Une couleur rouge ou rose n’est donnée que par des nitrates et des nitrites (par exemple, le trinitrate de glycéryle).

Sulfate ferreux B (test pour le cyanure)

Réactif

Dissoudre 10 g de sulfate ferreux dans 100 ml d’eau fraîchement cuit et refroidie (préparer frais).

méthode

Diluer 1 mL d’échantillon avec 2 ml d’une solution d’hydroxyde de sodium à 10% (p / v) et ajouter 2 ml de solution de sulfate ferreux. Ajouter suffisamment d’acide chlorhydrique à 10% (v / v) pour dissoudre le précipité d’hydroxyde ferreux.

Les indications

Une couleur bleue est donnée par le cyanure. Il n’y a pas de sources communes d’interférence.

Réactif Folin-Ciocalteu (test pour composés phénoliques)

Réactif

Pour la solution mère, dissolvez 100 g de tungstate de sodium et 25 g de molybdate de sodium dans 800 ml d’eau dans un flacon de 1500 ml, ajoutez 50 ml d’acide phosphorique et 100 ml d’acide chlorhydrique et reflux pendant 10 h. Cool, ajouter 150 g de sulfate de lithium, 50 mL d’eau et quatre à six gouttes de brome, et laisser reposer pendant 2 h. Faire bouillir pendant 15 minutes pour éliminer l’excès de brome, refroidir, filtrer et diluer jusqu’à 1000 mL avec de l’eau.

Cette solution stock doit être stockée à une température ne dépassant pas 4 ° et utilisée dans les 4 mois suivant sa préparation; il a une couleur jaune et ne doit pas être utilisé si une trace de couleur verte est présente.

Pour l’utilisation, diluer un volume de cette solution stock avec deux volumes d’eau.

méthode

Ajouter le réactif dilué à l’échantillon et rendre le mélange alcalin avec de l’hydroxyde de sodium 2 M.

Les indications

Une couleur bleue indique la présence d’un composé phénolique. La réaction est progressivement inhibée par une halogénation accrue du noyau phénolique.

Formaldéhyde-acide sulfurique

Réactif

À quatre volumes d’acide sulfurique, ajouter six volumes de solution de formaldéhyde (à l’aide d’une pipette à pointe inférieure à la surface de l’acide) avec agitation et refroidissement adéquat. Lorsque le réactif est chaud, il reste clair pendant environ 1 h. Si la turbidité se développe, cela peut être disséminé par chauffage dans un bain-marie à 100 ° pendant environ 1 min (notez que ce réactif n’est pas le même que celui utilisé dans le test Marquis).

méthode

Mélanger l’échantillon avec le réactif et chauffer à 100 ° pendant 1 min.

Les indications

Les benzodiazépines donnent généralement une couleur orange à l’exception du bromazépam et de la clozapine (un composé de type benzodiazépine), qui donnent tous deux du jaune et du flurazépam (rose).D’autres indications incluent les phénothiazines, les tétracyclines et les thioxanthènes. La tryptamine (marron) et la zomepirac (rouge) réagissent également. Aucune réponse n’est obtenue avec le chlordiazépoxyde, le diméthoxanate ou la proquamezine. Certaines des nouvelles benzodiazépines n’ont pas été testées.

Réactif Forrest

Réactif

Mélanger des volumes égaux d’une solution à 0,2% (p / v) de dichromate de potassium, une solution à 30% (v / v) d’acide sulfurique, une solution à 20% (p / p) d’acide perchlorique et une solution à 50% (v / v) solution d’acide nitrique.

méthode

Dissoudre l’échantillon dans un volume minimum d’acide chlorhydrique 2 M et ajouter un volume égal du réactif.Pour tester l’urine, ajouter 1 mL de réactif à 0,5 mL d’urine.

Les indications

Les couleurs rouge, rose, orange, bleu ou violet sont obtenues avec des phénothiazines. Une couleur bleue est obtenue avec certaines dibenzazépines. La couleur bleue est inhibée par la présence de phénothiazines, il faut donc ajouter un excès de réactif pour la surmonter.

Réactif FPN (réactif général pour les phénothiazines)

Réactif

Mélangez 5 ml d’une solution de chlorure ferrique à 5% (p / v), 45 ml d’une solution à 20% (p / p) d’acide perchlorique et 50 ml d’une solution à 50% (v / v) d’acide nitrique.

méthode

Dissoudre l’échantillon dans un volume minimum d’acide chlorhydrique 2 M (ou utiliser 1 mL d’urine) et ajouter un volume égal du réactif.

Les indications

Une variété de couleurs, du rose, du rouge, de l’orange, du violet au bleu, indiquent la présence de phénothiazines.

Réactif Froehde

Réactif

Dissoudre 1,0 g d’acide molybdique ou de molybdate de sodium dans 100 ml d’acide sulfurique concentré chaud.

méthode

Ajoutez une goutte du réactif à l’échantillon sur un carreau blanc.

Test de Fujiwara (réactif général pour les hydrocarbures halogènes)

Réactif

Solution d’hydroxyde de sodium 20% (p / v) fraîchement préparée.

méthode

Mélanger 2 mL du réactif et 1 mL de pyridine. Ajouter l’échantillon (1 ml d’urine) et chauffer dans un bain-marie à 100 ° pendant 2 min avec agitation.

Les indications

Une couleur rouge-rose dans la couche de pyridine indique la présence de composés qui possèdent au moins deux atomes d’halogène liés à un atome de carbone. Il s’agit notamment du chloramphenicol, du chlorbutanol, du chloroforme, de la dichloralphénazone, du trichloroéthane, du trichloroéthanol, de l’acide trichloracétique et du trichloréthylène. L’hydrate cloral et la dichlorophénazone réagissent eux-mêmes, mais sont excrétés dans l’urine sous forme d’acide trichloroacétique. Aucune couleur n’est donnée par le dicophane ( DDT ) ou le tétrachlorure de carbone, bien que l’exposition massive à ce dernier solvant puisse conduire à un test d’urine positif en raison de la présence de chloroforme comme contaminant. 2,2,2-Trichloroethanol donne une couleur jaune. Le LOD est de 1 mg / L.

Furfuraldehyde (réactif général pour les carbamates)

Réactif

Une solution à 10% (v / v) de furfural dans de l’éthanol.

méthode

Dissoudre l’échantillon dans de l’éthanol, placer une goutte de solution sur un papier filtre, ajouter une goutte du réactif et exposer le papier à des vapeurs d’acide chlorhydrique pendant 2 à 3 min.

Les indications

Un point noir indique la présence de carbamates non aromatiques. Les carbamates N-substitués ne réagissent pas. Le LOD est de 1 μg.

Test d’iode

méthode

Mélanger l’échantillon avec un volume égal de dioxyde de manganèse et chauffer soigneusement le mélange en rougeur terne sur une petite flamme. Répétez l’essai en chauffant l’échantillon seul.

Les indications

L’apparition de vapeur violette indique la présence d’iode dans la molécule. De meilleurs résultats sont parfois obtenus lorsque le dioxyde de manganèse est omis (par exemple, avec de l’amiodarone).

Test d’ioxodoplatinate (test général pour alcaloïdes et composés hétérocycliques azotés)

Réactif

Ajouter 2 ml d’une solution à 5% (p / v) de chlorure platinique et 5 g d’iodure de potassium à 98 ml d’eau et agiter jusqu’à dissolution. Ce réactif est souvent utilisé comme agent de localisation en TLC .

méthode

Dissoudre l’échantillon dans deux gouttes d’acide chlorhydrique 2 M, ajouter 2 à 3 ml du réactif et diluer à 10 ml avec de l’eau.

Les indications

Un précipité violet, violet bleu, brun-violet ou violet gris suggère la présence d’une base alcaloïdale (précipitée sous forme de complexe alcaloïde-iodoplatinate). Les couleurs les plus claires sont obtenues avec des amines tertiaires et quaternaires; les amines primaires donnent des couleurs indistinctes et les amines de petite masse moléculaire relative ne réagissent généralement pas.

Test Koppanyi-Zwikker

Réactif

Une solution à 1% (p / v) de nitrate de cobalt dans l’éthanol.

méthode

Dissoudre l’échantillon dans 1 mL d’éthanol, ajouter une goutte du réactif puis 10 μL de pyrrolidine et agiter le mélange.

Les indications

Une couleur violette est donnée par des substances qui contiennent les structures suivantes:

Imides, dans lesquels C = O et NH sont adjacents dans un cycle (p. Ex. Barbituriques, glutethimide, oxyphénisatine et saccharine).
Sulfonamides et d’autres composés avec SO2NH2 libre sur un cycle [par exemple, le clopamide, le furosémide, le sulfanilamide et les thiazides], ou avec -SO2NH2 dans une chaîne latérale (par exemple chlorpropamide), ou avec -SO2NH2 qui relie un cycle benzène avec un autre anneau autre que un cycle pyrazine, pyridazine, pyridine ou pyrimidine (par exemple sulfafurazole et sulfaméthoxazole). Ces dernières structures donnent des couleurs rose ou rouge-violet (par exemple sulfadiazine et sulfadiméthoxine).

Aucune réponse n’est obtenue avec des composés avec d’autres substituants sur l’atome d’azote. Des réponses anormales sont obtenues avec la paraméthadione et la théophylline (violet), et avec la cyclosérine, l’idoxuridine, la méphénytoïne, le niridazole et la riboflavine (pas de réponse). Notez que les chlorhydrates donnent une couleur bleue avant l’addition de pyrrolidine.

Le réactif de Liebermann

Réactif

Ajouter 1 g de nitrite de sodium ou de potassium à 10 ml d’acide sulfurique avec refroidissement et tourbillonnement pour absorber les fumées brunes.

méthode

Ajouter deux ou trois gouttes du réactif à l’échantillon sur un carreau blanc. Parfois, il est nécessaire d’effectuer l’essai dans un tube et de chauffer dans un bain-marie à 100 °. De nombreuses substances donnent des couleurs avec de l’acide sulfurique seul et l’essai doit être répété en utilisant de l’acide sulfurique au lieu du réactif.

Les indications

Ce test a été développé à l’origine pour donner des couleurs intenses aux phénols:

Les couleurs orange sont données par des substances qui contiennent un cycle benzénique monosubstitué non joint à C = O, N-C (= O) – ou à un cycle qui contient un groupe C = N-O-.
Les couleurs orange ou marron sont données par certaines substances qui contiennent deux anneaux de benzène monosubstitués (ou certains composés disubstitués dans lesquels le fluor est le deuxième substituant) qui sont liés soit à un atome de carbone, soit à des atomes de carbone adjacents.
Une large gamme de couleurs est donnée par des composés qui contiennent des groupes -OH, O-alkyle ou -O-CH2O- attachés à un cycle benzénique ou à un cycle dans une structure polycyclique qui contient un cycle benzénique. L’anneau de benzène ne doit pas supporter -NO2, ni être halogéné, ni contenir un substituant -O-ortho aux groupes oxy. Les composés contenant du soufre de l’anneau donnent une gamme similaire de couleurs.

Le test de Mandelin (test utile pour les stupéfiants et les antidépresseurs)

Réactif

Dissoudre 1,0 g de vanadate d’ammonium dans 1,5 ml d’eau et diluer à 100 ml avec de l’acide sulfurique concentré.

méthode

Ajoutez une goutte du réactif à l’échantillon sur un carreau blanc.

Les indications

Lors de l’interprétation du résultat de ce test, il convient de tenir compte de la couleur donnée par l’acide sulfurique et par le test de Liebermann. Les chlorhydrates donnent une couleur rouge avec ce réactif. Lorsque les couleurs diffèrent de celles fournies avec l’acide sulfurique ou le test de Liebermann, cela indique un cycle aromatique avec un cycle saturé de 5, 6 ou 7 chaînons qui ne contient qu’un seul atome d’azote. L’anneau hétérocyclique ne doit pas contenir un second atome d’azote ou un atome d’oxygène. Il ne doit pas être substitué ou lié par -CONH- au cycle aromatique. L’anneau aromatique ne doit pas avoir de -CF3 comme substituant. Des couleurs sont également produites si le soufre est dans un anneau, à condition que l’anneau ne contienne pas plus d’un atome d’azote.

Les valeurs de LOD sont: le sulfate de codeine 5,0 μg, l’amphétamine HCl 10,0 μg, la diamorphine HCl 20 μg, la métamfetamine 150 μg, la morphine 5 μg et la strychnine 0,05 μg.

Test de Marquis

Le test Marquis est un test utile à large spectre utilisé principalement pour les alcaloïdes d’opium et les ampéfines.

Réactif

Mélanger soigneusement 100 mL d’acide sulfurique concentré avec 1 mL de solution de formaldéhyde à 40% (v / v) (stable pendant plusieurs semaines si protégé de la lumière).

méthode

Ajoutez une goutte du réactif à l’échantillon sur un carreau blanc.

Les indications

Différentes couleurs qui représentent l’ensemble du spectre visible sont données par un grand nombre de composés. Les structures qui ont tendance à maintenir la réponse au réactif à l’extrémité violette du spectre sont, par ordre décroissant d’efficacité: anneau soufré (avec ou sans anneau aromatique); anneau d’oxygène (avec anneau aromatique); oxygène extra-anneau ou soufre (avec anneau aromatique); Composés aromatiques qui consistent entièrement en C, H, N. Ainsi, il y a une tendance à la réponse au réactif Marquis pour se déplacer progressivement vers une longueur d’onde plus longue (c’est-à-dire entre le vert et l’orange et le rouge) comme le rapport C, H, N à les autres groupes de la molécule augmentent.

Les valeurs de LOD sont: 1 μg pour le sulfate de codeine, le sulfate de méscaline, la méthadone HCl; 5 μg pour le tartrate lysergide, le métamphétamine HCl et la morphine; 10 μg pour l’amphétamine HCl et la diamorphine HCl.

Test de McNally

Réactifs

Une solution à 0,5% de sulfate de cuivre dans de l’acide acétique à 10%.
Une solution de nitrite de sodium à 2% (p / v) fraîchement préparée.

méthode

Dissoudre l’échantillon (1 mg) dans quelques gouttes d’acétone et ajouter 1 à 2 ml d’eau. Ajouter trois gouttes de solution 1 et un volume égal de solution 2. Agiter et chauffer dans un bain-marie à 100 ° pendant 3 min.

Les indications

Une couleur rouge indique la présence d’acide salicylique libre. L’acide aminosalicylique donne un précipité brun, et le diflunisal donne une couleur violette. Certains acides produits lors de la putréfaction des tissus donnent également des couleurs rouges dans ce test: l’acide p-hydroxyphénylacétique, l’acide p-hydroxyphénylpropionique et l’acide p-hydroxyphényl-lactique.

Le réactif de Mecke (test utile pour les alcaloïdes d’opium)

Réactif

Dissoudre 1,0 g d’acide sélénieux dans 100 ml d’acide sulfurique concentré.

méthode

Ajoutez une goutte du réactif à l’échantillon sur un carreau blanc.

Les indications

Une couleur bleue ou verte immédiate indique les opiacés.

Réactif de Melzer (réactif général pour champignons hallucinogènes)

Réactif

Dissoudre 1,5 g d’iode dans 100 ml d’une solution aqueuse contenant 5 g d’iodure de potassium et 100 g d’hydrate de cloral.

méthode

Placez quelques gouttes du réactif sur les spores de champignons ou les tissus de champignons à tester.

Les indications

Une couleur bleu, bleu-gris ou noir-gris indique des champignons amyloïdes. Un léger changement jaune ou nul indique que les champignons ne sont pas amyloïdes. Les psychyocybes sont toujours non amyloïdes.

Nitrate mercurique (réactif général pour les composés de type barbiturite)

Réactif

À une solution saturée de nitrate de mercure, ajouter du bicarbonate de sodium solide jusqu’à ce que l’effervescence cesse et que le précipité formé devienne jaune. Le précipité devient alors une couleur biscuitée.Ce réactif doit être fraîchement préparé, secoué immédiatement avant utilisation et ne doit pas être conservé pendant plus de 1 h.

méthode

Dissoudre l’échantillon dans la quantité minimale d’éthanol, ajouter une goutte du réactif opaque, secouer et examiner à intervalles pendant 2 min. Une solution vierge contenant uniquement de l’éthanol et du réactif doit être traitée de manière similaire en même temps.

Les indications

Une couleur gris foncé ou noir indique un groupe anion ou des sulfamides avec un anneau additionnel. La vitesse et l’intensité de la réaction varient entre les différents composés. L’anneau suivant imite réagir en ordre décroissant d’intensité: barbituriques, bemegride, phénytoïne> benperidol, cyclosérine, pimozide> glutethimide, oxyphénisatine> saccharine, sulfinpyrazone. Dans le cas des sulfamides, le succinylsulfathiazole, le sulfamoxole, le sulfanilamide, la sulfasomidine et le sulfathiazole réagissent avec une intensité plus élevée que tous les autres. Le chlorpropamide et le tolbutamide donnent une réponse modérée. Si utilisé comme pulvérisation, le LOD est de 1 à 5 μg pour les barbituriques.

Hydroxyde de potassium méthanolique

Réactif

Une solution à 20% (p / v) d’hydroxyde de potassium dans le methanol.

méthode

Ajoutez quelques gouttes du réactif à une solution de l’échantillon dans du methanol et chauffez si nécessaire au point d’ébullition pour développer la couleur.

Les indications

Un changement de couleur incolore ou de couleur pâle à rouge, orange, jaune, vert ou bleu est donné par des quinones, des diones qui possèdent un cycle aromatique, des phénols avec des groupes hydroxy adjacents et des composés qui contiennent des groupes nitro sur un anneau. Beaucoup de ces composés sont déjà colorés et donnent des solutions pâles ou incolores dans le méthanol.

Le réactif de Millon (réactif général pour les phénols)

Réactif

Dissoudre 3 mL de mercure dans 27 mL d’acide nitrique fumant et ajouter un volume égal d’eau sous agitation.

méthode

Ajouter 0,5 ml de réactif à l’échantillon et réchauffer le mélange.

Les indications

Une couleur rouge ou orange-rouge indique la présence d’une substance phénolique. Les arylamines primaires réagissent également. Certains composés basiques qui contiennent un groupe phénolique ne réagissent pas à ce test; une combinaison de ce test avec le réactif Folin-Ciocalteu est donc conseillée pour les composés phénoliques. Les phénols qui contiennent plus d’un groupe hydroxyle ne donnent pas la couleur rouge typique.Ce réactif ne réagit pas avec les phénols substitués par Cl, Br ou I.

Naphthol-acide sulfurique

Cet essai doit être effectué conjointement avec l’essai d’acide sulfurique.

Réactif

Mélanger 1 g de naphth-2-ol avec 40 ml d’acide sulfurique et chauffer dans un bain-marie à 100 °, avec agitation occasionelle, jusqu’à dissolution du naphth-2-ol.

méthode

Mélanger l’échantillon avec 1 mL de réactif, chauffer dans un bain-marie à 100 ° pendant 2 min et noter toute couleur produite. Refroidir, ajouter 1 mL d’eau et noter à nouveau la couleur.

Les indications

Une gamme de couleurs est obtenue avec des structures stéroïdiennes. Une réponse positive à ce test combinée à une réponse positive au test de l’acide sulfurique est révélatrice de la présence d’un stéroïde.

Les composés autres que les stéroïdes qui donnent des couleurs avec ce test comprennent l’hydrate cloral et le chloramphenicol (brun-jaune), l’amidon et l’acide tartrique (vert).

Le réactif de Nessler

Réactif

Dissoudre 50 g de chlorure mercurique et 35 g d’iodure de potassium dans 200 ml d’eau et refroidir.
Dissoudre 50 g d’hydroxyde de sodium dans 250 ml d’eau et refroidir.

Ajouter la solution froide 2 à la solution froide 1 et faire jusqu’à 500 mL. Laisser reposer le mélange et décanter le surnageant transparent (stable pendant plusieurs mois) pour l’utiliser. Stocker dans des bouteilles brun foncé loin de la lumière.

méthode

Ajouter le réactif (trois gouttes) à l’échantillon (trois gouttes), agiter et chauffer le mélange à 100 ° dans un bain-marie, en l’examinant toutes les minutes pendant 10 min. Une solution vierge devrait être traitée de manière similaire en même temps.

Les indications

Une couleur brun-orange est produite rapidement par des amides aliphatiques et des thioamides. La présence d’un cycle aromatique ralentit la réaction. Plus le groupe amide est proche de l’anneau, plus la réaction est inhibée. Les substituants dans le cycle peuvent provoquer une réaction faible. Une couleur noire immédiate est produite par des substances qui contiennent des groupes hydroxy ortho ou para et par des substances qui contiennent un groupe -NH-NH- ou -NH-NH2 dans une chaîne latérale aliphatique. Certains composés doivent être chauffés à 100 ° pour produire un noircissement.

Ninhydrine

Réactif

Dissoudre 0,5 g de ninhydrine dans 40 ml d’acétone.

méthode

Dissoudre l’échantillon dans du methanol, placer une goutte de solution sur un papier filtre, ajouter une goutte du réactif et sécher dans un courant d’air chaud.

Les indications

Une couleur violette qui apparaît rapidement indique la présence d’une amine primaire aliphatique ou d’un groupe d’acides aminés. La présence d’un cycle aromatique inhibe la réponse, et l’inhibition augmente, plus le groupe amino est proche de l’anneau, comme pour l’ampétamine (rose-orange), le procainamide et la protatamine (à la fois jaune). Si le groupe amino est associé à un cycle saturé, on obtient une couleur rose-violette positive mais faible (amantadine, rimantadine). La gentamicine donne une couleur violette après chauffage pendant 4 min.

L’acide nitrique, fumant

méthode

Mélanger l’échantillon avec trois gouttes d’acide nitrique fumant, chauffer à 50 ° pendant 30 s et observer toute couleur produite. Refroidir le mélange, ajouter deux gouttes à 2 ml d’acide sulfurique et observer la couleur. Au reste du mélange refroidi, ajouter 2 ml d’eau suivie d’hydroxyde de sodium 2 M, goutte à goutte, jusqu’à ce que le pH 8 soit atteint (utiliser un papier indicateur).

Les indications

Les phénols chlorés donnent une série de couleurs dans les trois parties de ce test.

Acide nitrique-sulfurique (réactif d’Erdmann)

Réactif

Mélanger 1 mL d’acide nitrique avec 30 mL d’acide sulfurique.

méthode

Dissoudre l’échantillon dans 1 ml d’éthanol, ajouter une pastille d’hydroxyde de potassium et évaporer à sec (100 ° dans un bain-marie). Au résidu, ajouter 0,5 ml d’eau et 1 ml de tétrachlorure de carbone, agiter et laisser séparer. Décrivez la couche de tétrachlorure de carbone inférieure et agitez-la avec 1 mL de réactif.

Les indications

Une couleur rouge dans la couche acide suggère la présence de clofenotane ou son métabolite, le dichlorodiphényldichloroéthylène ( DDE ). La couleur rouge change d’orange puis de vert. Les faibles couleurs roses sont données par l’aldrine, la dieldrine et l’endrine. Une couleur rouge est également donnée par le dichlorodiphényldichloroéthane ( DDD , mitotane), mais la couleur ne change pas.

Notez que la substance doit être testée pour s’assurer qu’elle ne donne pas de couleur avec l’acide sulfurique seul.

Acide nitreux

méthode

Dissoudre l’échantillon dans un volume d’eau minimum et ajouter une quantité de nitrite de sodium solide égale en volume à l’échantillon suivie de quelques gouttes d’acide chlorhydrique 2 M.

Les indications

Les couleurs orange ou jaune sont données par certaines sulfamides et des couleurs vertes, bleues ou violettes par certaines phénylpyrazolines.

Aucune réponse n’est obtenue avec le succinylsulfathiazole, le sulfacetamide, la sulfadiazine, la sulfadiméthoxine, la sulfaguanidine, la sulfamérazine, la sulfaquinoxaline, le sulthiame ou la propyphenazone.

Chlorure de palladium

Réactif

Dissoudre, à l’aide de la chaleur, 0,1 g de chlorure de palladium dans 5 ml d’acide chlorhydrique 2 M et diluer la solution à 100 ml avec de l’eau. Mélanger des volumes égaux de cette solution et de l’hydroxyde de sodium 2 M. Le réactif mélangé est stable pendant plusieurs semaines.

méthode

Mélanger l’échantillon avec 1 mL de réactif et chauffer à 100 ° dans un bain d’eau pendant 2 min. Une solution vierge devrait être traitée de manière similaire en même temps.

Les indications

Les couleurs rouge, orange, jaune, marron ou noir sont données par des composés aliphatiques qui ont un atome de soufre dans la chaîne et par des composés aromatiques qui ont un atome de soufre dans la chaîne latérale. Cependant, aucune couleur n’est donnée lorsqu’une chaîne S-alkyle est présente, à moins que la chaîne ne soit terminée par un groupe halogéné.

Aucune réponse n’est obtenue si le soufre est dans un groupe qui relie deux anneaux. Les agents réducteurs tels que l’acide ascorbique, l’hydrate cloral, le chloroforme et le glucose, et les composés qui contiennent une chaîne avec une liaison d’hydrazine (-NH-NH-, -NH-NH2) donnent une couleur translucide de couleur gris foncé ou noir, mais ne donnent pas la couleur graduelle jaune à orange à brun observée avec des composés contenant du soufre. Les composés qui contiennent des groupes hydroxyle adjacents sur un cycle aromatique donnent des couleurs oranges qui deviennent brunes.

Test de phosphore

méthode

À l’échantillon, ajouter 0,5 ml d’acide nitrique et 0,2 ml d’acide sulfurique et chauffer à 100 ° dans un bain-marie pendant 30 minutes. Refroidir, ajouter 1 mL d’une solution à 10% (p / v) de molybdate d’ammonium et la remplacer dans le bain-marie à 100 ° C pendant 5 min. Une solution vierge devrait être traitée en même temps.Pour certains composés, la réaction peut se produire après des temps de chauffage plus courts que ceux indiqués ci-dessus.

Les indications

Une solution ou un précipité jaune clair indique la présence de phosphore et suggère un pesticide organophosphoré, en particulier si l’échantillon est un liquide non miscible à l’eau. Le cyclophosphamide et les triclofos réagissent également.

Dichromate de potassium

Méthode 1

Dissoudre l’échantillon en agitant dans 0,5 ml d’acide chlorhydrique 2 M et ajouter quelques cristaux de dichromate de potassium.

Les indications

Une couleur brune immédiate, ou une couleur verte qui change en brun, indique la présence d’un aminophénol ou d’un phénol qui a deux ou plusieurs groupes hydroxy dans des positions adjacentes sur le cycle (voir tableau 19.29 ). Les monophénols, les phénols halogénés et les phénols avec des groupes hydroxyle méta les uns avec les autres réagissent plus lentement ou pas du tout.

Méthode 2

Si l’échantillon est un liquide, ajouter une à deux gouttes à 1 ml d’eau, puis 1 ml d’une solution saturée de dichromate de potassium dans de l’acide sulfurique à 50% v / v.

Les indications

Une couleur verte est donnée par l’acétaldéhyde, l’éthanol, le méthanol, le propan-1-ol et le propan-2-ol.

Réactif de Schiff

Réactif

Dissoudre 0,2 g de magenta basique (fuchsine, CI 42510) dans 120 ml d’eau chaude, refroidir, ajouter 20 ml d’une solution à 10% (p / v) d’hydrogénosulfite de sodium et 2 ml d’acide chlorhydrique et diluer jusqu’à 200 ml .Conserver à 4 ° et protéger de la lumière.

méthode

Ajouter l’échantillon à 1 ml du réactif.

Les indications

Une couleur violette indique la présence d’un aldéhyde aliphatique. Plus la chaîne carbonée est longue, surtout si elle est ramifiée, plus la réponse au test est faible.

Test de Scott (voir aussi test de thiocyanate de cobalt)

Réactif

Le thiocyanate de cobalt dissous dans de l’eau (2% p / v) puis dilué à 1: 1 avec de la glycérine.
Acide chlorhydrique concentré.
Chloroforme.

méthode

Ajouter une petite quantité de l’échantillon à tester dans un tube à essai, ajouter cinq gouttes de solution 1 et secouer. Si la cocaïne est présente, une couleur bleue se développe à la fois. Ajouter une goutte de solution 2 et secouer (la couleur bleue disparaît et une solution rose transparente se développe). Ajouter plusieurs gouttes de solution 3.

Les indications

La couche de chloroforme développe une couleur bleue intense si la cocaïne est présente. La méthadone réagit également.

La LOD est 60 μg de cocaïne HCl et 15 μg de méthadone HCl.

Test de Simon (test de nitroprussiate de sodium modifié):

Réactif

Dissoudre 1 g de nitroprussiate de sodium dans 100 ml d’eau et ajouter 2 ml d’acétaldéhyde à la solution avec un mélange complet.
2% de carbonate de sodium fraîchement préparé dans de l’eau distillée.

méthode

Ajoutez une goutte de solution 1 à l’échantillon, puis deux gouttes de solution 2.

Les indications

Une couleur bleu foncé indique une amine secondaire [par exemple, la métamphétamine, l’éphédrine, la 3,4-méthylènedioxymetamfétamine ( MDMA )] ou une amine hétérocyclique non substituée en tant que base libre.Une couleur bleu profond indique la présence de métamphétamine. Les amines primaires [par exemple, l’ampétamine, la méthylènedioxyamfétamine ( MDA )] donnent une couleur rose lent à rouge cerise.

Dithionite de sodium

Réactif

Une solution à 5% (p / v) de dithionite de sodium dans une solution à 10% (p / v) d’hydroxyde de sodium.

méthode

Appliquer le réactif sur l’échantillon, soit sur une tuile blanche, soit en solution dans un tube à essai. Une solution vierge devrait être traitée de manière similaire en même temps.

Les indications

Les couleurs sont produites par des composés bis (pyridyl). Les couleurs sombres sont susceptibles d’être fournies par certaines solutions métalliques en raison de la réduction.

Nitroprussiate de sodium

Réactif

Une solution à 1% (p / v) de nitroprussiate de sodium.

Méthode 1

Ajouter l’échantillon à 2 ml du réactif suivi d’une goutte d’hydroxyde de sodium 2 M.

Les indications

Les couleurs d’orange sont données par des cétones et des couleurs rouges par l’acétaldéhyde.

Méthode 2

Mélanger l’échantillon avec un volume minimum d’hydroxyde de sodium 2 M, évaporer à sec, dissoudre le résidu dans deux gouttes d’eau et ajouter 0,5 mL du réactif.

Les indications

Une couleur violette est donnée par des substances contenant du soufre labile dans la molécule et par des dithiocarbamates non substitués.

Méthode 3

Effectuer la méthode 2 ci-dessus, mais après évaporation à sec, chauffer le résidu jusqu’à ce qu’il soit jaune ou orange avant de continuer.

Les indications

Une couleur violette est donnée par certaines substances contenant du soufre labile et ne réagissent pas à la Méthode 2 (p. Ex. Clomethiazole, lincomycine et monosulfiram).

Nitroprussiate de sodium-acétone

Réactifs

Dissoudre 2 g de nitroprussiate de sodium dans 5 ml d’eau et ajouter 45 ml de methanol.
2% (p / v) de carbonate de sodium.
Acétone.
10% d’acétaldéhyde.

Méthode 1

Ajouter une goutte de solution 1 suivie d’une goutte de solution de 2 à 3 à 4 mg d’échantillon dissous dans la solution 3 sur une assiette. Une couleur pourpre indique l’ampétamine. Le LOD est de 30 μg.

Méthode 2

Ajouter une goutte de solution 1 suivie d’une goutte de solution 4 à 1 à 2 mg d’échantillon dissous dans la solution 3. Une couleur bleue immédiate est indicative de la métamfetamine. Le LOD est de 5 μg.

Picrate au sodium (test Steyn)

Réactif

Préparez une solution de 5 g de bicarbonate de sodium et 0,5 g d’acide picrique dans 100 ml d’eau.

méthode

Mélangez l’échantillon avec quelques gouttes de chloroforme et d’acide sulfurique pour hâter la réaction tout en tenant un morceau de papier filtre, imprégné du réactif, dans les vapeurs qui émanent du tube et en chauffant le contenu à 30 °.

Les indications

La couleur jaune du papier filtre passe de l’orange au brun-orange, puis au orange-rouge ou au rouge en présence de cyanure. Les résultats positifs sont donnés par des composés qui contiennent des groupes cyanure (par exemple cimetidine, diphénoxylate et isoaminile).

Acide sulfurique

méthode

Appliquer de l’acide sulfurique directement sur l’échantillon sur un carreau blanc ou dans un tube à essai.

Les indications

Une gamme de couleurs est obtenue avec des composés de différents types. Les stéroïdes donnent des couleurs orange ou jaune, dont beaucoup fluorescent sous la lumière UV (λ = 350 nm) soit immédiatement, soit après dilution. Les thioxanthènes donnent des couleurs rouges ou oranges qui fluorescent sous la lumière UV(λ = 350 nm).

Acide sulfurique fumant à l’acide sulfurique

Réactif

Mélanger ensemble 7 mL d’acide sulfurique et 3 mL d’ acide sulfurique fumant .

méthode

Dissoudre l’échantillon dans un volume minimum de toluène et ajouter une ou deux gouttes de réactif.

Les indications

Une couleur rouge qui apparaît dans la couche d’acide inférieure indique la présence de dieldrine (la couleur se développe rapidement) ou l’aldrine (la couleur se développe lentement). Une couleur rose-orange est obtenue avec de l’endrine.

Ester éthylique de tétrabromophénolphtaléine

Réactif

Dissoudre 50 mg d’ester éthylique de tétrabromophénolphtaléine ( TBPE ) dans 100 ml de chloroforme, agiter la solution pendant 2 minutes avec 1 ml d’acide chlorhydrique à 10% (v / v) et jeter la phase aqueuse. Sécher la couche organique avec du sulfate de sodium anhydre. Séparer l’agent séchant par filtration. Conserver le réactif dans une bouteille d’ambre à 4 °.

méthode

Placez 0,5 ml d’échantillon à tester dans un tube à essai conique, ajoutez 100 μl de tampon phosphate (10 mmol / L, pH 8,0) et mélange vortex. Ajouter 50 μL du réactif TBPE et du mélange vortex. Après 2 à 3 minutes, notez la couleur de la couche de chloroforme. Si l’échantillon à tester est un solide, dissoudre 1 à 2 mg du matériau dans 0,5 ml de tampon et continuer.

Les indications

Une couleur bleu profond indique des composés d’ammonium quaternaire. Une couleur orange, marron, rouge ou violet indique la présence de médicaments de base. Ce test est plus sensible aux amines tertiaires (p. Ex. Tricycliques, propoxyphènes, phénothiazines, diphenhydramine, phencyclidine, méthadone, péthidine, etc.).Son LOD est de 1 mg / L.

Test de Thalleioquin

méthode

Dissoudre l’échantillon dans un volume minimum d’acide chlorhydrique 2 M, ajouter deux gouttes de solution de brome , placer une goutte du mélange sur un morceau de papier filtre et exposer le papier à des vapeurs d’ammoniac.

Les indications

Une couleur verte indique la présence d’une structure de type quinine (p. Ex. Hydroquinidine, hydroquinine, quinidine, quinine). La cinchonidine et la cinchonine ne répondent pas.

Réactif de Trinder (voir chlorure ferrique)

Réactif

La solution est préparée comme suit: 40 g de chlorure mercurique et 40 g de nitrate ferrique sont dissous dans 850 ml d’eau distillée. 10 ml de HCl concentré sont ajoutés et la solution est diluée à 1 L. Cette solution est stable pendant 1 an.

méthode

Quelques gouttes du réactif sont ajoutées à quelques gouttes d’urine. Une couleur pourpre indique la présence d’un salicylate. Ce test a été conçu pour le dosage quantitatif des salicylates dans le sérum, avec le chlorure de mercure servant de précipitant de protéines. Le test du chlorure ferrique a été modifié pour l’utilisation sur des échantillons de sang (Asselin et Caughlin, 1990). Le sang (0,5 ml) est mélangé avec 1,0 ml d’acétone et le vortex est mélangé. L’échantillon est centrifugé et 50 μL du surnageant sont ajoutés à 50 μL de chlorure ferrique. Une couleur pourpre à l’interface indique les salicylates.

Réactif à la vanilline

Réactif

Dissoudre 1 g de vanilline dans 20 mL d’acide sulfurique , réchauffer si nécessaire.

méthode

Ajouter deux gouttes du réactif à l’échantillon, chauffer dans un bain-marie à 100 ° pendant 30 s et noter toute couleur produite. Diluez le mélange refroidi en ajoutant quelques gouttes d’eau et notez tout changement de couleur.

Les indications

Beaucoup de composés de structure chimique différente réagissent avec ce réactif. Cependant, pour les barbituriques, la réaction semble être un phénomène stérique qui dépend de la structure de la chaîne latérale en position 5. Les couleurs foncées, dissoutes ou changées en violet, bleu ou vert par dilution, sont produites lorsque l’une ou l’autre chaîne latérale est supérieure à deux atomes de carbone ou contient un cycle cycloalkylène. La branche peut être proximale à l’anneau pyrimidine, mais pas distal. Aucune couleur n’est obtenue si les deux chaînes latérales ont moins de trois atomes de carbone de longueur ou si l’une ou l’autre est ramifiée distalement ou contient un noyau arylique. Les chaînes longues, droites et saturées semblent également entraver la réaction.

Les hydroxbarbituriques donnent des réponses positives, mais le bien-être, la glutethimide, la phénytoïne et la primidone ne répondent pas. Aucune réponse n’est obtenue avec les acides amobarbital, aprobarbital, barbital, butobarbital, énallylpropymatique, hexal, ibrome, idobutal, métharbital, méthylphénobarbital, néalbarbital, phénobarbital ou phénylarthylbarbiturique. Avec un réactif à froid, une couleur orange est produite par pentobarbital, secobarbital et thiopental, et une couleur marron par cyclopentobarbital.

Réactif de Zwicker (test de cobalt alcalin)

Il s’agit d’un test général pour les composés de type barbiturique.

Réactif

Dissoudre 0,5 g de sulfate de cuivre (II) pentahydraté dans 100 ml d’eau distillée.
Ajouter 0,5 ml de pyridine à 95 ml de chloroforme.

méthode

Ajouter quelques gouttes de solution 1 à l’échantillon à tester, suivies de quelques gouttes de solution 2 puis de la chaleur.

Les indications

La présence d’une couleur bleu violet indique les barbituriques. Le LOD est de 1000 μg pour le phénobarbital.

Traduit en Français par : BENSAKHRIA Ayoub (source: Clarke’s Analysis of Drugs and Poisons 3rd Edition)